9004-06-2

    纯胰弹性蛋白酶由240个氨基酸残基组成单一肽链，分子内有4对二硫键。肽链走向和空间构型与糜蛋白酶极为相似，在pH5时分子呈球形，分子内有两个α-螺旋区。它是一种单纯蛋白酶，不含辅基和金属离子，也无变构中心，其活力取决于特异的三维结构。活性中心氨基酸残基为：组45·天93·丝88，其反应性丝氨酸附近的氨基酸残基排列顺序为：一甘·天·丝·甘一。

    粉碎猪胰脏丙酮(冷)→脱水；脱脂；干燥丙酮粉

    (2)提取：
    取丙酮干粉按丙酮粉重量加入一定量的水，使其重量体积比为5%，在不断搅拌下于20～25℃提取2h，提取物过滤时加入少量滑石粉以助滤在20℃以下，棉纶布自然过滤或板框压滤，得澄清提取液。

    丙酮粉水：20℃→提取提取液

    (3)吸附：
    提取液中加入一定量蒸馏水稀释至2～3倍，加到用ph6.4磷酸缓冲液(0.1mol/L)平衡过的Amberlite CG-50树脂m(原料):m(树脂)=1:2，在不断搅拌下，20～25℃吸附2h，收集树脂，用蒸馏水漂洗树脂直至洗脱液无色为止，得吸附物。

    提取液Amberliet CG-50树脂→吸附吸附物

    (4)洗脱：
    每1份的吸附树脂加入1.5倍ph9.3氯化铵缓冲液(0.5mol/L)，在不断搅拌下，洗脱1h，分离树脂，洗脱液以乙酸(2mol/L)调节ph至中性，过滤，得澄明洗脱液。

    吸附物ph9.3缓冲液→洗脱洗脱液

    (5)沉淀在－5℃下，边搅拌边在洗脱液中加入3倍已冷却到-5℃丙酮，继续搅拌10min，于－5℃静置沉定数小时。

    洗脱液丙酮；－5℃→沉淀沉淀

    (6)脱水、干燥收集沉淀 ，用丙酮洗涤3次，再用乙醚洗涤3次，真空干燥，得弹性酶原粉。

    沉淀丙酮；乙醚→脱水；干燥弹性酶原粉

2.制剂：
    弹性酶冻干针剂：15mg/支；肠溶片：10mg(200u)/片；肠溶胶囊：6mg/粒；肠溶丸：10mg/丸。

    复方弹性酶软膏为含本品和硫酸新霉素的白色软膏。质量标准如下。

    上海市药品标准1993年版

    指标名称                              指标
    含量：(1)弹性酶，%               0.25或0.50
          (2)硫酸新霉素,u/kg             600万
    其他                    符合软膏剂有关规定

3.弹性酶(9004-06-2)用法及剂量：
    临床用于：
    (1)高脂血症：肠溶胶囊，每次6mg。肠溶片，每次10～20mg，每日3次。或粉针剂，肌内注射，每日15mg，3个月为一疗程；
    (2)慢性支气管炎：肠溶胶囊，每次12mg，每日3次，一个月为一疗程。
    (3)动脉粥样硬化、高血压、脂肪肝：剂量同高脂血症。

4.不良反应和注意事项：
    偶有过敏和轻度胃肠症状，出现腹胀、食欲不振、肝区痛、口干、嘴唇发麻。无需治疗，能自愈。

5.贮藏：
    遮光密闭2℃以下保存。

6.药效学：
    本品系由胰脏提取或由微生物经发酵而制得的能溶解弹性蛋白的酶，由240个氨基酸组成的多肽，分子量为25900。本品能影响脂代谢，阻止胆固醇在体内的合成并促进其转化为胆汁酸，从而降低血清胆固醇，并有防止动脉粥样硬化及抗脂肪肝作用。此外还有促进血凝、加强子宫收缩等作用。

7.鉴别：
    取效价测定项下的供试品溶液2ml，加刚果红－弹性蛋白20mg，硼酸盐缓冲液[取硼酸0.496g与硼砂1.146g，加水溶解并稀释成1000ml，调节pH值至8.8]5ml，置37℃水浴中，充分振摇10分钟后离心，上清液应显红色。

8.检查：
    (1)干燥失重：取本品0.2g，以五氧化二磷为干燥剂，在60℃减压干燥4小时，减失重量不得过8.0%。
    (2)炽灼残渣：取本品0.4g，依法检查，遗留残渣应不得过2.0%。
    (3)重金属　取炽灼残渣项下遗留的残渣，依法检查，含重金属不得过百万分之二十五。

9.效价测定：
    刚果红-弹性蛋白溶液的制备：取刚果红-弹性蛋白100mg,精密称定，置100ml量瓶中，加本品的溶液(称取本品适量，置研钵中，按制备供试品溶液的方法，制成每1ml中含本品约40单位的溶液)20ml，置37℃水浴中，不断振摇至刚果红-弹性蛋白全部溶解，加入磷酸盐缓冲液[取磷酸二氢钠42.3g及磷酸氢二钠51.2g,加水溶解并稀释成1000ml，调节pH值至6.0]50ml，并用硼酸盐缓冲液(pH8.8)稀释至刻度。

　　供试品溶液的制备：取本品约0.1g，精密称定，置研钵中，先加预冷至10℃以下的硼酸盐缓冲液(pH8.8)约2ml，研磨均匀，再滴加1mol/ml氢氧化钠溶液约4滴，研磨约20秒，使溶解，立即加入预冷至10℃以下的硼酸盐缓冲液(pH8.8)稀释，移至100ml量瓶中，并稀释至刻度。精密吸取适量，用硼酸盐缓冲液(pH8.8)稀释成每1ml中约含本品4～6单位的溶液。

　　标准曲线的制备：精密量取刚果红-弹性蛋白溶液0、2.0、4.0、6.0、8.0与10.0ml，分别置10ml量瓶中，各加硼酸盐缓冲液(pH8.8)和磷酸盐缓冲液(pH6.0)的等量混合液至刻度。以零管为空白,照分光光度法。在495nm的波长处测定吸收度，以刚果红-弹性蛋白量为横座标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。

　　测定法：取直径约20mm的试管3支，分别加入刚果红-弹性蛋白20mg及硼酸盐缓冲液(pH8.8)3.0ml，置37℃水浴中预热10分钟，依次在第一管加硼酸盐缓冲液(pH8.8)2.0ml，第二、三管各精密加入预热到37℃的供试品溶液2ml，立即计时,置37℃水浴连续振摇20分钟(准确计时)，立即加入磷酸盐缓冲液(pH6.0)5.0ml，混匀，以2500转/分,离心20分钟。精密吸取上清液2ml,加硼酸盐缓冲液(pH8.8)和磷酸盐缓冲液(pH6.0)的等量混合液2.0ml,摇匀，以第一管为空白，照分光光度法在495nm的波长处测定吸收度，从标准曲线上查得相应的刚果红-弹性蛋白量，按单位定义折算成单位数，计算本品的单位。

　　在上述条件下，20分钟水解1mg刚果红-弹性蛋白所需的酶量为一个本品的单位。

10.处理：
    通常对水是稍微危害的，不要将未稀释或大量产品接触地下水，水道或者污水系统。若无政府许可，勿将材料排入周围环境。